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加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中

来源:未知作者:admin 更新时间:2018-12-06 22:31
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培育基的新皿中或者瓶中。 3)细胞冻存:待细胞发展形态优良时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培育基后插手少量胰酶,细胞变圆零落后,插手约1ml含血清的培育基后插手冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻

  4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培育基的新皿中或者瓶中。

  3)细胞冻存:待细胞发展形态优良时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培育基后插手少量胰酶,细胞变圆零落后,插手约1ml含血清的培育基后插手冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。

  2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培育瓶中,置于37℃培育箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下察看细胞消化环境,若细胞大部门变圆并零落,敏捷拿回操作台,轻敲几下培育瓶后加少量培育基终止消化。

  2) 培育前提: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培育箱湿度为70%-80%。

  3. 按6-8ml/瓶补加培育基,悄悄打匀后吸出,在1000RPM前提下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培育液后吹匀。

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  运输和保留:利用含有优良胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后,可在1000RPM,常温前提下,离心5min后,于干净操作台弃去上清,插手保举利用的培育基后转移至10cm培育皿或者T75培育瓶中培育,传代达到细胞发展形态优良时,再进行冻存。具体操作见细胞培育步调。

  ,传代可参考以下方式:1. 弃去培育上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

  留意事项:1. 收到细胞后,若发觉干冰已挥发清洁、冻存管瓶盖零落、破损及细胞有污染,请当即奉告我们。

  该细胞属源于一般肾的近曲小管细胞,通过导入HPV-16 E6/E7基因此获得长生化。将含有HPV-16 E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7转染外生包装细胞Psi-2,Psi-2细胞发生的病毒再去传染兼嗜性包装细胞系PA317,最初将PA317发生的病毒颗粒导入一般的肾皮质近曲小管细胞。虽然pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性,但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH阐发显示HK-2细胞来历于单克隆。PCR检测证明HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。

  2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物风险性,必需在二级生物平安台内操作,并请留意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

  1) 苏醒细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中敏捷摇晃解冻,插手4mL培育基夹杂平均。在1000RPM前提下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培育基后吹匀。然后将所有细胞悬液插手培育瓶中培育留宿(或将细胞悬液插手10cm皿中,插手约8ml培育基,培育留宿)。第二天换液并查抄细胞密度。肾近曲小管上皮细胞

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